Dle normy ČSN ISO 6222 (75 7821) se rozlišují organismy kultivovatelné při teplotách 22 a 36 °C. Jedná se o všechny aerobní bakterie, kvasinky a mikromycety, schopné tvořit kolonie v/na povrchu specifického pevného kultivačního média za předem definovaných podmínek. Organismy, kultivovatelné při 22 °C, hůře snášejí vyšší teploty a nemají hygienický význam. Vzorek lze aplikovat očkováním na povrch kultivačního média či přímo do něho. Přímý výsev do kultivačního média vyhovuje mikroaerofilním či fakultativně anaerobním mikroorganismům. Kultivačním médiem je agarové médium s kvasničným extraktem. Do Petriho misky (⌀ 9 cm, popř. 10 cm) se naočkuje 0,1 - 5 ml vzorku a přidá se agar ochlazený na teplotu asi 45 °C, vzorek se krouživými pohyby promísí s médiem. Doporučením je očkovat pro každý vzorek 2 paralelní stanovení. Misky se ztuhlým agarem se obrátí dnem vzhůru a inkubují se při teplotě 22 °C ± 1 °C po dobu 72 hod ± 4 hod v termostatu. Vyhodnocením výsledků je počet všech vyrostlých kolonií na povrchu i uvnitř půdy (lze použít lupu); misky se splývajícím růstem se nevyhodnocují (viz obr. 1), to samé platí i pro misky s méně či více než 30 až 300 kolonií; výsledek se uvádí v přepočtu na 1 ml vzorku jako počet KTJ (průměr hodnot ze 2 paralelních stanovení). Nelze-li vzorek vyhodnotit ihned po ukončení inkubace, lze misky uložit do chladničky s teplotou + 4 °C nejdéle však do 24 hod. Organismy, kultivovatelné při 36 °C, mají/nemají hygienický význam, ve vodě přežívají obtížně a velmi krátkou dobu. Při tomto stanovení jsou stresovány mikroorganismy špatně snášející tepelný šok při nalévání roztopeného kultivačního média k naočkovanému vzorku vody do Petriho misky. Pracovní postup a médium je identické jako v případě metody stanovení při teplotě 22 °C, r ozdíl je ve výši kultivační teploty, kterou je 36 °C a doba kultivace je 24 hod ± 1 hod. Vyhodnocení je stejné jako v případě stanovení mikroorganismů s optimem růstu při teplotě 22 °C.

 

---

Obr. 1: Příklad nevhodně naředěného vzorku, kdy misky se splývajícím růstem se nevyhodnocují.

  Grafy souvislostí do úrovně:      I       II       III